A Pinacoteca Ambrosiana foi criada com o objetivo de inspirar novos artistas através das suas pinturas, por isso o Cardeal Federico Borromeo criou um complexo que também incluía a Biblioteca Ambrosiana e a Accademia del Disegno como local de estudo para os jovens artistas da Contrarreforma.
A biblioteca abriga 35 mil manuscritos, entre eles um exemplar ilustrado do século 5º da Ilíada, de Homero, primeiras edições da Divina Comédia (1353) de Dante e o Codex Atlântico de Leonardo da Vinci. São 12 volumes de projetos e anotações de engenharia, hidráulica, arquitetura, mecânica, urbanismo, ciência e tecnologia, feitas durante mais de 40 anos entre 1478 e 1519. Para mostrar o máximo possível desta obra, as páginas em exposição mudam a cada três meses.
A galeria de arte doada por Borromeo com obras do século XIV confirma o gosto variado do cardeal.
Há ainda um bom acervo de arte veneziana, com obras de Tiepolo, Giorgione, Ticiano e Bassano, bem como painéis de Bergognone, pintor lombardo do século XV.
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